Ключова разлика - Blunt срещу Sticky End Ligation

Рестрикционните ендонуклеази са специфични ензими, които отрязват двуверижна ДНК (dsDNA). Те също са известни като молекулярни ножици в молекулярната биология. Рестрикционните ензими са в състояние да разпознаят специфични къси последователности на dsDNA, известни като места за разпознаване, и разцепват фосфодиестерни и водородни връзки, за да отворят двойни вериги. В резултат на разцепването от тези ензими се получават ДНК фрагменти с различни видове краища, като лепкави и тъпи краища. ДНК лигазата е ензим, използван в молекулярната биология за присъединяване на две съседни нишки на ДНК чрез образуване на нови връзки. Етапът е известен като лигиране и според вида на лигирания край на ДНК, те могат да се означават като тъп край на лигиране и лепкав край. Ключовата разлика между тъпата и лепкавата крайна лигиране е, че тъпата крайна лигация се получава между фрагменти на ДНК, които съдържат два тъпи края, докато лепкавата край се свързва между 5 'и 3' надвеси. В сравнение с тъпата крайна лигатура, лепкавата крайна лигатура е по-ефективна и стабилна.

СЪДЪРЖАНИЕ 1. Преглед и ключова разлика 2. Какво е тъп лигинг 3. Какво е лепкав лигинг 4. Сравнение рамо до рамо - тъп срещу лепен край 5. резюме

Какво е тъп лигинг?

Някои рестрикционни ендонуклеази могат да отрежат ДНК на противоположните основи и да произведат тъпи фрагменти на ДНК. Тези ензими са известни като тъпи резачи; те се разцепват право до средата на рестрикционния сайт, без да оставят единични нанизани надвиснали основи. Затъпените краища са известни също като непревишаващи се краища, тъй като нямат 3 'и 5' надвиснали основи в краищата. И двете направления завършват от основни двойки в тъпи краища. Най-често срещаните тъпи режещи ензими са EcoRV HaeIII, AluI и SmaI.

Тъпото крайно лигиране е включено между два тъпи края. Това не е лигиране на стърчащи основи. Това лигиране е по-малко ефективно от лепкавото свързване. Въпреки това, в някои случаи, тупната лигиране става по-изгодна от лепкава крайна лигатура, особено когато се лигират PCR продукти. PCR продуктите винаги се произвеждат с тъпи краища. Липирането с тъп край не изисква допълващи се краища в ДНК за лигирането.

Какво е лепкава крайна лигация?

Някои рестрикционни ендонуклеази са в състояние да изрежат dsDNA, оставяйки надвиснало парче едноверижна ДНК в края. Тези краища са известни като лепкави или надвиснали краища. Липсващо крайно лигиране се получава между два фрагмента на ДНК, които съдържат съвпадащи надвеси, тъй като лепкавите краища са притежавани с несдвоени основи и се нуждаят от допълнителни бази, за да образуват връзки. Следователно е необходимо да се използва един и същ рестрикционен ензим и за двата източника на ДНК, за да се получат съвпадащите лигиращи фрагменти.

Липсващата крайна лигатура е по-ефективна и често е много желателна при процесите на клониране. Има няколко рестрикционни ензими, които произвеждат лепкави краища. Те са EcoRI, BamHI, HindIII и т.н.

Каква е разликата между Blunt и Sticky End Ligation?

Обобщение - Блънт срещу Sticky End Ligation

Рестрикционните ендонуклеази са в състояние да разцепят dsDNA и да произведат ДНК фрагменти с различни краища. Те разпознават специфични последователности и ограничават ДНК, създавайки лепкави и тъпи краища. Лепналите краища имат несдвоени основи в края на фрагментите. Тъпите краища се създават благодарение на прав разрез и те имат основни двойки в краищата. Липсващата крайна лигиране изисква две комплементарни едноверижни ДНК парчета. Тъпото крайно лигиране възниква между всеки два тъпи крайни фрагмента. Това е разликата между тъпата и лепкава лигация.

Позовавания: 1. Робъртс, Ричард Дж. „Как рестрикционните ензими станаха работните коня на молекулярната биология.“ Сборник на Националната академия на науките. National Acad Sciences, Web. 12 април 2017 г. 2. Аднан, Амна. Използване на рестрикционни ензими в биотехнологиите. Np, и Web. 12 април 2017г

Любезно изображение: 1. „EcoRV ограничение на сайта.rsh“ от Рамин Херати - Създадено с Inkscape (Public Domain) през Commons Wikimedia 2. „Рестрикционен ензим Eco RI“ от Tinastella - Собствена работа (Public Domain) чрез Commons Wikimedia